Para la organización ecologista, este espectáculo es incompatible con la conservación de la biodiversidad presente en los espacios naturales y naturalizados aledaños, que incluye numerosas especies de aves protegidas
La ubicación elegida por el Ayuntamiento de Madrid para la celebración de la mascletá en la que se prevé hacer explotar más de 300 kilos de pólvora se encuentra inmediatamente adyacente a varios espacios con valores ambientales y presencia de biodiversidad únicos en la ciudad de Madrid, como la Casa de Campo (en concreto algunas de sus zonas más nobles y mejor conservadas con árboles de gran porte como la Huerta de la Partida o los Reservados), los Jardines del Campo del Moro y el renaturalizado Río Manzanares. Además, toda la zona en la que se desarrollaría el espectáculo está comprendida en el entorno del Bien de Interés Cultural Casa de Campo.
En los referidos espacios está constatada la presencia continuada y la reproducción de numerosas especies de aves, entre ellas varias incluidas en el Catálogo Regional de Especies Amenazadas y en el Listado de Especies Silvestres en Régimen de Protección Especial como el pico menor, el martín pescador, la garza real, el martinete común o el andarríos chico entre otras.
Existe abundante bibliografía científica relativa a los efectos negativos de la pirotecnia sobre los animales domésticos y la fauna silvestre, especialmente en las aves, según la cual es previsible que el espectáculo, aunque sea puntual, tenga un impacto significativo sobre la avifauna que habita la zona y sus alrededores.
Para Ecologistas en Acción, la celebración de la mascletá podría contravenir la Ley estatal del Patrimonio Natural y de la Biodiversidad, la Ley para la Protección y Regulación de la Fauna y Flora silvestres en la Comunidad de Madrid y la Ley de Espectáculos Públicos y Actividades Recreativas en la Comunidad de Madrid.
Por todo ello, Ecologistas en Acción ha presentado denuncia ante la Consejería de Medio Ambiente de la Comunidad de Madrid contra la autorización del Ayuntamiento de Madrid que permite la celebración de la mascletá en la explanada del Puente del Rey, y ha solicitado que se ordene su paralización en tanto no se lleve a cabo una evaluación objetiva de los impactos del espectáculo sobre la fauna. La organización ecologista ha dirigido también un escrito a la Dirección General de Sostenibilidad y Control Ambiental del Ayuntamiento de Madrid, solicitando la paralización de la mascletá.